Očkování sterilního obilí je nejběžnější způsob, jak z tekutého mycelia připravit obilnou sadbu. Zrno poskytuje houbě živiny a mnoho jednotlivých očkovacích bodů. Po úplném prorostení se obilná sadba používá k naočkování produkčního substrátu.
Úspěch stojí na třech věcech: správně hydratovaném zrnu, dostatečné sterilizaci a čisté práci při vpichu.
Co budete potřebovat
- vhodné obilí, například žito, pšenici, oves nebo čirok,
- zavařovací sklenici nebo pěstební vak s filtrem a injekčním portem,
- tlakový hrnec nebo autokláv určený pro sterilizaci,
- tekuté mycelium, novou sterilní jehlu a 70% isopropylalkohol,
- rukavice, papírové utěrky a čisté pracoviště bez průvanu.
1. Připravte obilí
Zrno musí uvnitř obsahovat dostatek vody, ale jeho povrch má být před plněním nádoby oschlý. Příliš suché obilí prorůstá pomalu, přemokřené zrno se slepuje a vytváří vhodné podmínky pro bakterie.
- Odstraňte prach a poškozená zrna a obilí důkladně propláchněte.
- Hydratujte jej zvolenou a vyzkoušenou metodou. Zrna mají být nabobtnalá, ale neměla by se ve velkém trhat nebo měnit v kaši.
- Nechte povrchovou vodu dobře odkapat a oschnout.
- Naplňte nádoby přibližně do dvou třetin až tří čtvrtin. Musí v nich zůstat prostor pro pozdější promíchání.
2. Sterilizujte správně
Naplněné nádoby sterilizujte v tlakovém hrnci nebo autoklávu. V mykologické praxi se používá sterilizační teplota kolem 121 °C; potřebná doba závisí na velikosti a hustotě náplně i na použitém zařízení. U menších nádob se často pracuje v rozmezí přibližně 90 až 120 minut od dosažení pracovního tlaku, větší vaky potřebují delší ověřený cyklus.
Vždy dodržujte návod výrobce tlakového zařízení. Neotevírejte jej pod tlakem a neblokujte pojistné prvky. Po sterilizaci nechte obilí zcela vychladnout, ideálně bez otevírání nádoby.
3. Připravte čisté pracoviště
- Zavřete okna, vypněte ventilátor a omezte pohyb v místnosti.
- Očistěte stůl a připravte si všechny pomůcky na dosah.
- Umyjte si ruce, nasaďte čisté rukavice a dezinfikujte je.
- Otřete injekční port alkoholem a nechte povrch krátce oschnout.
Ještě lepší výsledky poskytuje práce před laminárním boxem nebo v dobře vyčištěném still-air boxu. Ani technické vybavení ale nenahradí klidný a důsledný postup.
4. Připravte stříkačku
Uzavřenou stříkačku jemně promíchejte, aby se shluky mycelia rozptýlily. Sejměte kryt a nasaďte novou sterilní jehlu. Nedotýkejte se jehly, jejího hrdla ani vyčištěného portu.
Pro každý nový pracovní celek je nejjistější použít novou sterilní jehlu. Pokud pracujete podle protokolu s tepelnou sterilizací jehly, nechte ji před vpichem bezpečně zchladnout, aniž by se dotkla nesterilního povrchu.
5. Očkujte obilí
- Propíchněte vydezinfikovaný injekční port.
- Vstříkněte malé množství kultury na více míst podél stěny nádoby, pokud to konstrukce portu umožňuje.
- U menších sklenic obvykle stačí jednotky mililitrů. Přesné množství závisí na objemu a vlhkosti obilí; více kapaliny neznamená automaticky rychlejší růst.
- Jehlu vytáhněte, port znovu očistěte a nádobu označte názvem druhu a datem očkování.
6. Nechte sadbu prorůstat
Nádobu postavte na čisté místo mimo přímé slunce. Teplotu volte podle konkrétního druhu; pro mnoho běžně pěstovaných dřevokazných hub je vhodné rozmezí přibližně 20 až 26 °C, ale teplomilné druhy mohou vyžadovat více. Uzavřené zrno nepotřebuje vysokou vzdušnou vlhkost v místnosti.
Jakmile mycelium viditelně obsadí přibližně pětinu až třetinu zrna, lze nádobu jednou promíchat. Tím se kolonizované body roznesou do celého objemu. Poté ji nechte v klidu dorůst.
7. Zkontrolujte výsledek
Zdravá obilná sadba bývá rovnoměrně prorostlá bělavým myceliem a zrna si zachovávají strukturu. Samotná rychlost není důkazem čistoty.
Varovné příznaky
- zelené, černé, výrazně růžové nebo oranžové povlaky,
- slizká a rozpadlá zrna nebo nezvykle mokré skvrny,
- růst, který se po promíchání zastaví,
- nafukování vaku bez odpovídajícího růstu mycelia,
- výrazně kyselý nebo hnilobný zápach po pozdějším otevření.
Podezřelou nádobu oddělte. Neotevírejte ji před laminárním boxem ani v prostoru s čistými kulturami.
Co následuje po úplném prorostení
Plně kolonizované obilí se promíchá s vhodným produkčním substrátem. Hlívy dobře využívají pasterovanou slámu nebo sterilizované pilinové směsi, reishi a další dřevokazné druhy se často pěstují na sterilizovaných pilinách z listnatého dřeva. Správný substrát a podmínky najdete v profilech jednotlivých druhů.
Než začnete, přečtěte si také základní návod k tekutému myceliu a článek o sterilní práci.
Praktické pomůcky najdete v kategoriích Laboratoř a Tekuté mycelium.